酶抑制法檢測蔬菜農藥殘留實驗技術

來自 實驗室儀器網

目前，應用于果蔬農藥殘留檢測方面的技術有很多，比如說儀器分析法、生物活體分析法以及酶抑制法等，相比之下，儀器分析法不僅檢測成本較高，而且技術難度較大，無法在短時間內掌握果蔬的質量安全，生物活體分析法準確性低，檢測結果不具備參考價值。而酶抑制法不僅簡便、靈敏，而且檢測快速，可以在最短的時間內對果蔬的質量安全情況進行了解。由此可見，在未來的時間里，酶抑制法在果蔬農藥殘留檢測方法必然會得到越來越廣泛的應用。現通過選取NC-800農藥殘毒快速測定儀做例檢測技術的簡要介紹，來為日后蔬菜農藥殘留檢測工作的開展提供的參考。

酶抑制法概述

• 工作原理

酶抑制檢測法主要對較有高、毒的機磷和氨基甲酸類農藥進行檢測的方法。上述的兩種類型的農藥是乙酰膽堿酯酶的底物，（改為：酶抑制法主要針對具有高、毒特性的有機磷和氨基甲酸酯類農藥殘留的檢測。上述兩種類型的農藥能抑制乙酰膽堿酯酶的活性。）所以，在對其進行檢測的時候，可以采用乙酰膽堿酯酶的活性來檢測樣品中是否含有以上兩類農藥，在酶反應試驗中加入顯色劑和底物觀察顏色的變化，能夠判斷出果蔬中是否含有有機磷和氨基甲酸類農藥殘留。對其兩種農藥的殘留情況進數據分析，給判斷結果提供科學的依據。

• 技術優勢

就目前酶抑制法在果蔬農藥殘留檢測方面的應用優勢來看（1）獨創打印機內置式防塵設計；（2）六通道測試技術，一次測量6個樣品，同時顯示測量結果；（3）適用于移動實驗室；（4）最多存儲5000條樣品數據；（5）人性化計算機操作程序，具備查詢統計功能；（6）具備獨創直聯式網絡聯接功能；（7）具備分布式農殘監測信息網絡方案，可由電腦生成檢測報告，并即時啟動網絡傳輸，并反應至安全監測信息網絡。

檢測方法

采用酶抑制法開展果蔬農藥殘留檢測工作。

（1）對照測試。根據檢測樣品不同，對照測試的具體開展細節也存在一定程度的細微差別，但大多采用的是以下測試方法：取酶100μL，然后加入1cm比色皿中，加緩沖液2.5mL，混勻靜置抑制10分鐘后，并在此基礎上加入顯色劑100μL，加入底物100μL，混勻后第一時間將其放入儀器內的樣品池進行對照測試；按“對照測量”待到設定的測量時間后可得數據ΔAo值。

（2）樣品測試。無論是水果樣品還是蔬菜的檢測樣品，在測試的時候，都需要將其切成1cm見方的小塊，瓜果類削皮，葉菜類剪葉然后取出2g放到三角燒瓶中，（改為：在測試的時候，瓜果類削皮，葉菜類剪葉，切成約1cm見方的小塊，然后取出2g放到三角燒瓶中，）然后在瓶中加入10mL緩沖液，振蕩1分鐘左右，用濾紙將混合液中的固體物濾除，所得到的清液便可以作為待測樣品液。待測樣品取得之后，接下來的任務就是測試，首先要取酶100μL，加入1cm比色皿中，加入待測試液2.5mL，混勻靜置抑制10分鐘后，再加入顯色劑100μL，加入底物20μL；混勻后第一時間將其放入儀器內進行樣品測試。待到設定的測量時間后可得數據ΔAt值。

（3）結果計算。測試完成之后便可進行結果計算，酶抑制法對果蔬農藥殘留檢測的計算公式為：抑制率（%）=[（ΔA0-ΔAt）/ΔA0]×100%。其中，ΔA0、ΔAt分別表示的是對照測試的吸光度變化值和樣品測試的吸光度變化值。

（4）結果判斷。結果計算出中所得到了抑制率所表示的就是酶被抑制的程度，（改為：計算結果中所得到的抑制率表示的是酶被抑制的程度，）不用數字的抑制率表示果蔬樣品中農藥殘留的程度也不相同，40%以下為合格樣品，40%-50%之間為可疑農藥殘留超標樣品，而50%以上的則是農藥殘留超標樣品。一般來說，對于40%以上的樣品，應該進行必要的2次以上測量，如果條件允許，還可以用氣相色譜儀等方法對檢測結果作進一步確認。

注意事項

在利用酶抑制法開展果蔬農藥殘留檢測工作的時候，為了確保檢測結果的準確性和及時性，在開展工作的時候，檢測人員需要注意以下事項：

1、注重酶的重要性。應用酶抑制法進行果蔬檢測的時候，檢測工作的靈敏度和結果的可靠性與酶的種類有直接的關系，乙酰膽酯酶是有機磷和氨基甲酸酯類藥劑的最適反應底物，其活性能夠專一性的被上述兩類農藥所抑制，所以，采取酶來對這兩類農藥進行檢測，其效果更具可靠性。

2、靜置時間。靜置時間的控制對檢測結果也會造成直接的影響，無論是時間過長或過短，都會導致檢測結果的準確性受到影響。所以，在檢測工作中，檢測人員必須要將靜置時間嚴格控制在10分鐘，避免由于時間誤差而給檢測結果造成的影響。

3、反應溫度。通常情況下，酶顯色反應的溫度應該在37-38℃之間，一旦溫度低于37℃，那么酶反應的速度就會變慢，延長檢測的時間，所以檢測前要開機預熱。（備注：此處表述有不妥，開機預熱是為了讓儀器達到穩定狀態的。儀器的“對照測試”已經克服了溫度帶來的影響。）

4、保存環境。樣品提取液的pH對乙酰膽堿酯酶的活動有影響，最佳測試pH為7.5-8.0，既適合于酶的反應，適合于蔬菜中農藥的提取。

5、樣品提取條件。酶試劑、顯色劑以及底物的保存在0-5℃環境，但切忽結冰，在使用的時候則應該等到其恢復到室內溫度時才能夠使用。

6、試劑配制。配緩沖液及底物試劑時只能用的可以是蒸餾水或純凈水，不能用礦泉水、自來水。

7、防止試劑污染。器具專用所有用于轉移試劑樣品的器具都要專用并貼上標志，以混用而造成交叉污染。用可調移液器吸取不同試劑或樣品液時，必須更換不同的塑料吸嘴。每種試劑“只出不進”

8、用移液器吸時，應先將按手按至第一檔（即按下去有一阻力點的位置，不能將按手按到底）再將吸嘴伸進溶液中，緩緩放手將溶液吸上，要將吸進的溶液放出來，就需要將手按到底。（備注：加“按”字顯通順點）

9、檢測后用具清潔。所使用過的用具或工具如比色皿、移液器、塑料吸嘴、三角瓶、漏斗、燒杯等首先用自來水沖洗干凈，再用純凈水或蒸餾水沖洗，涼干。小塑料吸嘴、比色皿需用純凈水或蒸餾水浸泡30分鐘后撈上來再涼干，重復使用。

綜上所述，隨著社會各界對農作物產品質量安全重視程度的不斷提高，對蔬菜農藥殘留檢測技術也進行不斷優化與完善也是非常重要的。從本文的介紹我們能夠看出，酶抑制法在果蔬農藥殘留檢測方便、靈敏、快速、經濟，能夠在最短的時間內了解蔬菜農藥殘留情況。為人們能夠吃上安全的蔬菜和水果提供充足的保障。

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